Después de la toma de Tenochtitlan, los españoles tuvieron tanta confianza en los tlaxcaltecas que los llevaron a las principales expediciones de conquista y colonización. A su vez los tlaxcaltecas, como fundadores, gozaron de privilegios que no tuvio otra población indígena. 
Muchas familias tlaxcaltecas participaron en la colonización de lugares como San Juan del Río, en Querétaro, Tlaxcalancingo, en Puebla, San Esteban de Nueva Tlaxcala, San Miguel de Mezquitic, en San Luis Potosí, Colotlán, en Jalisco, y San Cristóbal de las Casas, en Chiapas.
Llegaron hasta la Florida y la Habana. En la primera mitad del siglo XVI acompañaron a Cortés en su expedición a Pánuco y auxiliaron a Pedro de Alvarado en Guatemala
También fueron con Guzmán al oeste de México y con el que había sido su gobernador, Luna y Arellano, a la Florida
También fueron con Guzmán al oeste de México y con el que había sido su gobernador, Luna y Arellano, a la Florida
Una de las expediciones que atestigua sobre la activa participación tlaxcalteca es la que se llevó a cabo para colonizar Zacatecas, San Luis Potosí, Coahuila.
