Thread by @molbio08

Plasmidgateについてですが、今朝、早朝の4時からKevinさん登場のRumbleライブが開催されました。セネフさんのプレゼンから始まり、最後はKevinさんのプレゼンで終わるというものでした。KevinさんはmRNA型生物製剤へのDNAの大量残存をどのような経緯で見つけたかを説明していました。リンクは次に。

セネフさんのプレゼンはプリオンに関するものでした。これもスライドを使用して説明していて参考になりました。今回はこのRumble動画で聞いたことを中心に発信します。Kevinさんは誠実な研究者という印象でした。
rumble.com/v2dgaf6-scienc…

KevinさんはmRNA型生物製剤へのDNAの大量残存をどのような経緯で見つけたかを説明していました。mRNA型生物製剤に、転写が途中で完了した短いRNAが含まれているかもしれないと考えてRNAを逆転写してDNAに変換して配列決定をしてみたら予想していなかったベクター配列が見つかったというのが出発点。

その後、DNAの定量、塩基配列の決定などを行った結果、大量のDNAの夾雑を見つけたという流れです。環状のプラスミドDNAも残存していて大腸菌を形質転換できてコロニーができるくらいですから、スパイクタンパク質の全長とT7プロモーターが連結されたものが残存している可能性は否定できない。

Kevinさんは発現ベクターの配列を既に公開しており、さらにKevinさんが検証用に設計したPCRプライマーの配列も公開ずみ。後に続く研究者は出てくるでしょう。今回、Kevinさんが調べたロットだけなのか、あるいは多くのロットに同様に発現ベクターが含まれているかはいずれ、明らかになるでしょう。

私が当初からmRNAワクチンのリスクを説明し警告したにもかかわらず、残念ながら接種してしまった人間が、私の周辺にも少なからずいます。そのため、今回のDNAの夾雑は特定のロットに限られていると言う結論を私は期待しています。どのような結論になるか他の研究者の追加の情報を待ちたいと思います。

T7プロモーターは哺乳類細胞では機能しないと思いがちですが、もう一つ論文を紹介しておきます。ここで紹介する論文では、T7プロモーターがヒト細胞で機能することを示しています。T7プロモーターがHeLa細胞で機能するというもの。HeLa細胞はヒト子宮がん由来の有名な細胞。
pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8406019/

スパイク遺伝子がT7プロモーターと連結された形態でヒトゲノムに組み込まれたときにスパイク遺伝子が発現する可能性は考えておくべきでしょう。スパイクのｍRNAは環状プラスミドを制限酵素で一カ所切断して、それを使用してT7RNA合成酵素でｍRNAを大量に合成しています。

通常であれば、この方法では、1分子のDNAから10倍～100倍のｍRNAを合成できるとされていますので、このように大量に夾雑していることは考えにくいのですが、ウリジンが修飾されたシュードウリジンであるためにRNA合成の効率がかなり低下している可能性も考えられますのでこの点も検証が必要です。

ｔRNAにはシュードウリジンが含まれていますのでｔRNAを合成するRNA合成酵素はシュードウリジンを効率よく利用できるはずですが、mRNAにはシュードウリジンは通常含まれません。したがってｍRNAを合成するタイプのRNA合成酵素がシュードウリジンをウリジンと同様に利用できるかは不明です。

混じっている発現ベクターが環状のものかあるいは切断されたものかをKevinさんは解析していますが、環状のものも切断されたものも両方含まれている。環状のものだけであれば、残存したとしてもゲノムに組み込まれる際にはランダムな場所で切断されてからゲノムに組み込まれることになります。

この場合にはゲノムに組み込まれてもスパイクタンパク質を発現する可能性は低いでしょう。しかし、実際には、T7プロモーターの上流部で切断していますので、もしもゲノムに取り込まれるとするとT7プロモーターとスパイク遺伝子が連続した形でゲノムに組み込まれる可能性は高いと思います。

発現ベクターの夾雑が招くリスクはもう一つあります。SV40プロモーターがこの発現ベクターには組み込まれていますので、この配列を含むDNA断片が発がん遺伝子の上流部に組み込まれると発がん遺伝子の発現が亢進します。このことは細胞のがん化のリスクを高めることは言うまでもありません。

DNA型腫瘍ウイルスであるSV40の強力なプロモーターのゲノムへの組み込みのリスクはKevinさんも言及。このようにベクターDNAが混じっているようではエンドトキシンの混入も懸念されます。これも彼は動画でコメントしています。エンドトキシンは細菌由来の毒素でアナフィラキシーなどの原因になります。

何度も書いているように発現ベクターがmRNA型生物製剤に大量に残存しているということを発表しているのは現時点ではKevinさん一人です。またKevinさんはロットを多数調べたわけでもありません。しかしながら、ファイザーとモデルナ両方で同様に観察されたということを私は大変重く見ています。

ゲノムへの組み込みがどのような細胞でおきるかについても議論されていました。DNA断片がゲノムに組み込まれる場所はランダムです。また培養細胞にプラスミドを導入する実験を行うと一定の確率でゲノムに入ります。組み込まれる機構も相同組み換えだけではないことを考える必要があります。

増殖している細胞であればゲノムに組み込まれる可能性がありますが動画で彼がコメントしていたのは生殖系列の細胞と免疫系の細胞です。特に免疫系の細胞においてはゲノムの再構築が頻繁に行われますので、リンパ節にLNPが移行してDNA断片の組み込みがおきる可能性が高いのではと私も思いました。

今回の件は、今後も接種を進めようとしている世界唯一の国？の日本では特に重く捉える必要があります。このような発表が行われた以上、ｍRNAワクチンにプラスミドDNAの夾雑（コンタミネーション、コンタミとかいいます）がないことを相当な数のロットを用意して、複数の方法で至急、解析すべきです。

その際には、厚労省傘下の感染研で解析するとともに、mRNAワクチンや厚労省およびその関係機関と利害関係がない第三者機関でも併せて早急に確認すべきです。このような視点から考えると、ワクチン研究開発の大型研究費を獲得している研究者を対象から外すのは当然のことでしょう。

今回の件で最も重大なのはmRNAワクチンの品質管理の問題。環状プラスミドの直鎖状への変換も不十分で、最終産物にかなりの量のDNAが夾雑。これは人に接種するものとしては失格です。日本政府が接種を推奨したものはmRNA型生物製剤であってｍRNA/DNAハイブリッド型生物製剤ではなかったはずです。

接種を全て中止しDNAの夾雑を調べることが急務。Kevinさんの情報を私が発信しているのは日本以外ではｍRNAワクチンのリスクの理解が広がり接種する人がいなくなりメーカーを相手の訴訟が頻発。ところが日本だけはしつこく追加接種を推奨中です。接種の即時中止を求めます。最後にKevinさんの写真を。

最後に補足ですが、DNAの夾雑が明らかになったのは現段階では二価ワクチンだけですので武漢型しか接種していない人はDNAが混じっているかどうかは不明です。… twitter.com/i/web/status/1…