Thread by @mellziland

Vamos de fio instrutivo: RT-PCR, RT-qPCR, PCR, qPCR... o que tudo isso significa e por que estamos usando a terminologia errada para as PCR que estamos fazendo para a COVID-19?

Segue o fiozinho da Mell 🧶

Primeira coisa, vamos definir o que é a REPLICAÇÃO, TRANSCRIÇÃO e por fim TRANSCRIÇÃO REVERSA de um material genético (DNA)!

A replicação é um conceito de biologia molecular que pode ser simplificado em pegar as fitas de DNA e fazer cópias delas, ou duplicá-las.

Cada fita de DNA interage com a outra, formando uma dupla-fita. É a forma convencional que desenhamos/representamos um DNA, usualmente. Uma fita é complementar a outra, e essa interação estabiliza essa forma de visualização chamada dupla hélice!

Quando fazemos a replicação, a gente separa as duas fitas, usa cada uma como molde e faz uma versão complementar. As duas fitas antigas voltam a formar uma dupla-helice, e as duas fitas novas, formam uma dupla-helice, pois são complementares também!

Magia da duplicação

Já a transcrição, é o processo de eu criar uma fita de RNA a partir de uma das fitas do DNA acima citado, por exemplo! Eu utilizo a informação desse DNA e vou criando uma fita de RNA que conterá essa informação, que pode ser, por exemplo, a instrução pra montar uma proteína

E por fim temos a TRANSCRIÇÃO REVERSA, que ao invés de eu fazer um RNA a partir de um DNA, eu faço um DNA a partir de um RNA! É realmente o processo reverso!

O que isso tem a ver? Bom a PCR envolve muito da compreensão desses conceitos! Vamos em partes:

1) PCR significa REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE. Polime...quê? A polimerase é a enzima que faz a REPLICAÇÃO! O nome completo dela é DNA Polimerase, e tem vários tipos!

O que a PCR faz é repetir extensivamente os ciclos de replicação, ou seja, se no primeiro ciclo eu tenho 2 fitas de DNA (1 dupla hélice) formando +2 iguais (ou seja, 2 fitas formando 4), no próximo ciclo eu terei 4 fitas formando +4 (ou seja, 4 formando 8).

Eu já fiz muitas reações de PCR que envolviam 40 ciclos! Então vocês imaginam a quantidaaaaaaaaaaaaade de DNA no final que teremos, se cada ciclo, teoricamente numa reação perfeita e com 100% de eficiencia, tu tem 2 elevado na n fitas presentes!

Dito isso, a gente pode ter 2 tipos de PCR: a SEMIQUANTITATIVA (PCR) ou QUANTITATIVA (qPCR, ou PCR EM TEMPO REAL).

A principal diferença entre elas é que na semiquantitativa, após o fim da reação, eu preciso visualizar o meu produto em um gel (de agarose, normalmente).

Já na quantitativa ou em tempo real (qPCR) a cada ciclo eu consigo já visualizar uma curva de amplificação (2->4; 4->8; 8->16), ainda que eu não saiba a sua eficiência (isso a gente calcula depois). E é justamente essa que a gente usa para a detecção do vírus da COVID-19!

Só que antes da gente ir pra PCR, como nosso vírus em questão tem seu material genético de RNA, precisamos fazer uma etapa anterior, chamada de TRANSCRIÇÃO REVERSA! Lembra dela? Transformamos esse RNA em um DNA, para daí submeter a qPCR (quantitativa hein?)!

Por isso a forma adequada E CORRETA de chamar o procedimento realizado para o diagnóstico da COVID-19 pela técnica de PCR é RT-qPCR! Pois envolve tanto a etapa de transcrição reversa (RT) quanto a etapa de PCR em tempo real ou quantitativa (qPCR).

Achou o erro? Pois é!

Muita gente se refere a PCR da COVID-19 como RT-PCR ou somente PCR. Claro, tu tá falando com alguem, tu diz PCR e a pessoa ja associa ao teste molecular e tudo mais. Mas quando estamos escrevendo e criando documentos de divulgação, é importante mantermos tudo sempre correto!

Há várias outras formas de PCR, recentemente muita gente tem falado da PCR LAMP, que eu posso trazer em outro momento para a gente dar uma estudada.

Mas por hora, fiquem com esse resumex:

PCR = reação em cadeia da polimerase, semiquantitativa
qPCR = reação em cadeia da polimerase, quantitativa
RT = reação de transcrição reversa
RT-PCR = a PCR da 1ª linha + a fase de RT
RT-qPCR = a PCR da 2ª linha + a fase de RT (COVID-19!)

Bora RT? (COMPARTILHAR e não fazer transcrição reversa)