Thread by @IxchelDeLaLuz

Aprobadas por @COFEPRIS y @SSalud_mx las primeras pruebas serológicas para SARS CoV2, #Covid19_mx

1. Ensayo inmunoenzimatico cuantitativo.
2. Prueba rápida por inmunofluorescencia en tiempo resuelto.
3. Prueba rápida en cassette por inmunocromatografía.

gob.mx/cofepris/accio…

Hasta el momento: 2 pruebas rápidas cualitativas (¿hay o no hay anticuerpos? Para IgG e IgM) y 1 cuantitativa (¿hay o no hay anticuerpos, en qué cantidad? Sólo para IgG) #Covid_19 cc @glucosa_atomica

En el comunicado @SSalud_mx indica cómo deben ser reportados e interpretados los resultados.

IgG: anticuerpos de protección qué se generaron por respuesta inmune por infección o contagio (asintomático incluso)

IgM: anticuerpos relacionados con la infección activa.

Recuerden que el listado de pruebas de @COFEPRIS se irá actualizando conforme se vayan evaluando y autorizando el uso de otras pruebas serológicas.

Las pruebas serológicas son las que se realizan en un componente de la sangre llamado SUERO. O sea, estas pruebas NO se realizan con muestras nasales o faríngeas.

La búsqueda de ANTICUERPOS se hace en la sangre, de donde se obtiene el suero.

El suero se obtiene tomando una muestra de sangre en un tubo sin aditivos para esperar a que coagule y después mediante centrifugación separar el suero (líquido) del coágulo que contiene las células sanguíneas (glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas).

Tubo 1: Sangre total recién extraída por vía venosa. Tubo 2. Sangre centrifugada, el suero es el líquido amarillo sobrenadante, ahí están los anticuerpos.

(El suero no es lo mismo que plasma, el plasma es el líquido donde flotan las células de la sangre y para conservarlo fuera del cuerpo se requiere que el tubo o bolsa donde se va a colocar la sangre tenga un aditivo anticoagulante.)

Los tubos para separar suero generalmente son de color ROJO o amarillo, la diferencia con el amarillo es que tiene un gel para separar el coágulo (rojo) del suero y evitar que se vuelvan a mezclar. Algunos métodos para anticuerpos sugieren sólo usar tubos de tapón rojo.

Entonces, para una prueba de serología para #COVID_19, te tienen que tomar una muestra de sangre, forzosamente.

Miren lo que me encontré: El inserto de la prueba rápida por inmunocromatografía, vamos a analizarlo...

CORONACHECK es su nombre comercial (o uno de sus nombres comerciales).

Admite sangre total, suero o plasma. O sea, no es exclusivamente serológica. Te pueden tomar muestra en tubo rojo, amarillo, lila. También te pueden tomar sangre del dedo pero DEBEN pasarla a un tubito.

Así se ve el dispositivo: es un cassette como prueba de embarazo o de VIH. Las cajitas deben traer cada cassette en un pouch o bolsita individual y el buffer o agüita para diluir la muestra en un gotero para todas las pruebas o con un vial con las 2 gotitas para una sola prueba

Además, traen unas pipetas muy monas para medir y tomar 10 microlitros de sangre, suero o plasma del tubo (por eso no pueden hacerte la prueba directo del dedo). Miren, aquí se ve el pouch individual, el gotero para todos los pouchs y la pipetita desechable para cada muestra.

Según el inserto, se colocan 10 microlitros de muestra en el pozo cuadrado que dice S de sample y 2 gotas de buffer en el pozo redondo que dice B de buffer. Y se esperan 10 minutos, sí, como con una prueba de embarazo casera, mas o menos... Y se lee el resultado a simple vista.

En la vida real, cuando se coloca la muestra y el buffer se ven así:

Pasados los 10 minutos se lee el resultado que puede ser variable pero lo mínimo a observar es esto: Una línea en C que es la región de CONTROL. Todas las pruebas deben de dar esa línea. Si no aparece, hay que descartar el cassette y repetir.

Línea en C: negativo para IgG e IgM.

Línea en C e IgG: IgG positivo e IgM negativo.

Línea en C e IgM: IgM positivo e IgG negativo.

Línea en C, otra en IgG y otra en IgM: positivo para IgG e IgM (como en la foto).

Si no sale C, es INVÁLIDA, no importa lo demás.

¿Se ve refácil, no? Pues no. Se requiere cierto adiestramiento y destreza para hacerlo en el labo. Hay que tener un protocolo por escrito verificado por el responsable sanitario del laboratorio, que sea seguido al pie de la letra por cualquiera que esté facultado para hacerla.

Ya les había pasado este dato: 75% de los errores de una prueba de laboratorio se cometen en la fase preanalítica; es decir, desde que se acuerda una cita, desde que se compran los reactivos, desde que llega el paciente al labo, hasta que la muestra es depositada en el cassette.

Esto incluye malas tomas de muestra, confusión de muestras, mal etiquetado, que la muestra se pierda o el tubo se rompa o se derrame, barbaridad y media que se debe evitar a toda costa y para eso te entrenas en fase preanalítica.

Hay otros errores muy fáciles de cometer en las pruebas rápidas: 1. No etiquetar el cassette adecuadamente. 2. No leer entre los 10 y 20 minutos (se pasa el tiempo, tomas una llamada, cuando te acuerdas ya pasó media hora, etc, etc). DEBES SEGUIR EL PROTOCOLO, PUNTO.

Ahora, asumiendo que trabajas súper bien, te apegas al protocolo y tienes todo bajo control, volvamos al inserto de la prueba y hablemos de su desempeño:

Para IgG: La presencia de anticuerpos tipo IgG sugiere que el sujeto ha sido expuesto al virus y ha desarrollado una respuesta inmune, típicamente esto ocurre al menos dos semanas después de la exposición y expresión clínica de la enfermedad...

La presencia de IgG no determina en forma categórica que ya no se tiene riesgo de contraer la enfermedad, pero sugiere que es de menor riesgo que quien no tiene anticuerpos.

En resumen: son anticuerpos de protección, indican que ya te infectaste y quizá podrías ser inmune.

Según el inserto, de 369 que se reportaron para IgG, 369 resultaron en verdad negativos, ninguno positivo. O sea, su tasa de falsos negativos es del 0%. Un falso negativo para IgG sería alguien que ya se infectó y tiene los anticuerpos IgG pero lo reportan SIN esos anticuerpos.

Aclaro aquí que muchos asumen que los anticuerpos IgG podría indicar INMUNIDAD, como pasa con otro tipo de infecciones, lo cual podría ser cierto pero aún no es concluyente por cuanto a reinfecciones ni a la duración de la inmunidad. Y entonces hablemos de los IgG positivos:

Según el inserto, de 77 pacientes reportados con IgG positivo, 75 fueron realmente positivos y 2 negativos. O sea, de esos 77 reportaron a 2 que no tenían anticuerpos IgG como positivos, y siguiendo la lógica de mi tweet anterior: como inmunes.

Y aunque suena muy alentador hablar de estas pruebas como útiles para determinar inmunidad, y por ejemplo, mandar a los presuntamente inmunes a la calle, a volver al trabajo o a atender pacientes, de cada 100 podrían estar mandando a trabajar a 3 que NO se han infectado.

Si mandan a esos 3 a trabajar porque presuntamente están inmunes, los exponen a que se contagien fuera y entonces la prueba rápida fracasaría terriblemente para ellos.

Aquí una nota que habla un poco del posible uso de este tipo de pruebas: dailymail.co.uk/health/article…

Veamos rápidamente el inserto para IgM: los anticuerpos de la infección activa.

De 81 reportados presuntamente positivos, 3 resultaron negativos y 78 positivos. 3 falsos positivos: 3 reportados enfermos cuando estaban sanos o tenían otra infección = angustia injustificada.

De 375 reportados presuntamente negativos, 368 fueron realmente negativos y 7 positivos.
7 falsos negativos: 7 realmente enfermos reportados como NO-COVID19. 7 que al dar "negativos" estarían en riesgo de quedar fuera de la vigilancia epidemiológica y de seguir contagiando.

Lo cierto es que no hay prueba infalible. Las pruebas rápidas son tamizajes, no son pruebas diagnósticas y SIEMPRE deben ir acompañadas de pruebas confirmatorias (vean el inserto, sólo se pudo medir su desempeño hasta que fueron contrastadas con pruebas confirmatorias (RT-PCR)).

No se puede exigir o implementar indiscriminadamente un sistema de tamizaje masivo de pruebas rápidas para #COVID_19 si no se cuenta antes con un programa de salud pública u ocupacional que permita tomar decisiones basadas en evidencia para determinar la utilidad de estas pruebas

De la segunda prueba hablaremos un poco más tarde, nomás déjenme darle una buena leída a la página y entenderle tantito, por fa'. 😝

Listo. La segunda prueba, en realidad son 2: Una para IgG y otra para IgM.

2019-nCoV Specific Test (IgG & IgM antibody determination kit) Beijing Diagret Biotechnologies Co., Ltd

Prueba rápida, Inmunofluorescencia en tiempo resuelto.

Aquí toda la info (no está en chino):

IgM: en.diagreat.com/prod_view.aspx…

IgG: en.diagreat.com/prod_view.aspx…

Aunque es serológica, también se puede hacer en sangre total, suero o plasma. También es un cassette pero en realidad son 2: uno para IgG y otro para IgM. Cada cassette con su buffer. Aquí la foto de los kits, el de IgM es idéntico en presentación:

OJO: Hay otra prueba rápida de la misma marca pero no es la validada por COFEPRIS, se llama "2019-nCoV IgG/IgM Antibody Rapid Test Kit" y es muy parecida a la primera prueba de la que hablé porque se lee a simple vista, pero no está autorizada en México.

El fundamento de esta segunda prueba es muy parecido al de la primera. Según el instructivo, se coloca una cantidad de sangre/plasma/suero en el buffer y se mezclan. Unas gotas de la mezcla se colocan en el cassette y se esperan 15 minutos para poder hacer la lectura.

Si se fijan, en el cuarto paso hay un aparatito. Es el lector del resultado que detecta fluorescencia, pues no se puede leer a simple vista. De acuerdo al comunicado de COFEPRIS, de los 3 aparatos de lectura para la prueba, éste es el que estaría aprobado, el D10.

Es decir, todo laboratorio o point of care (POC) que ofrezca esta prueba, debe tener el equipo para leerla en modelo D10, la única manera para leer el resultado es con la luz fluorescente de este aparato que está calibrado para leer los cassettes de IgG e IgM.

Lo que sucede es que si en la muestra hay anticuerpos IgG o IgM, éstos se "pegarán" a sustancias del buffer que tienen la capacidad de FLUORESCER bajo la lámpara del equipo. Si se detecta fluorescencia, hay anticuerpos, si no se detecta, el resultado es negativo.

El hecho de incorporar la fluorescencia en la detección, vuelve la prueba más sensible y específica. Que sea semiautomatizada evita que las lecturas sean subjetivas o difíciles de interpretar (son simples rayitas, pero créanme: pasa!).

La prueba se puede hacer para IgG, IgM o las 2, cada tipo de anticuerpo en su propio cassette, cada uno su mezcla con buffer y su propia lectura en el aparato.

Entre algunos puntos que se pueden leer en el instructivo, destaco el siguiente: "Todo resultado positivo debe ser confirmado por otro método". Y sí, porque aunque sea por fluorescencia, sigue siendo un screening o tamizaje para confirmar por RT-PCR en.diagreat.com/Private/Files/…

De la tercera prueba hablaremos mañana, Architect SARS CoV-2 IgG de Abbott Laboratories Inc. Ensayo Inmunoenzimático cuantitativo, ya que quiero resolver un par de dudas con una amiga que trabaja en Abbot y ya no son horas. Linda noche, seguimos mañana 🙂

Ok, vamos a explicar la 3a prueba aprobada por COFEPRIS para #covid_19mexico. Igual, obtuve información del inserto, la prueba trae sus propios calibradores, controles, con un inserto para c/u. Architect SARS CoV-2 IgG, Abbott Laboratories Inc Ensayo Inmunoenzimático cuantitativo

COFEPRIS marca 4 números de catálogo:

6R86-12: Kit de controles
6R86-02: Kit de calibradores
6R86-22: Prueba para 100 análisis por equipo
6R86-32: Prueba para 500 análisis por equipo

Sí: 100 y 500 determinaciones. ¿Alguien ha estado insistiendo en el tema de PRUEBAS MASIVAS?

Lo anterior significa que para cada prueba hay que:

1. Calibrar el equipo.
2. Correr controles negativos (plasma humano no infectado) y negativos (material inactivado procedente de sangre
humana sin células, reactivo (POSITIVO) para la IgG anti-SARS-CoV-2).
3. Hacer la prueba.

Esos controles son internos, además el laboratorio tiene que cumplir periódicamente con un control de calidad externo y acreditarlo para demostrar que sus resultados son correctos.

Mencioné "el equipo". Les presento EL equipo: Abbott ARCHITECT i System, que es toda una familia de equipos que hacen pruebas de laboratorio cuya detección o lectura es por QUIMIOLUMINISCENCIA. Aquí algunos de ellos:

Aquí les presento fotos de unas personas trabajando en un Architect de Abbott, para que se den idea del tamaño del equipo, también pueden ver que uno tiene rueditas :3

Igual, aunque le llaman prueba serológica, esta prueba admite suero o plasma. Nada de muestras de cadáveres, ni otros líquidos, y si leen, hay ciertas condiciones que cumplir para que la prueba se desempeñe adecuadamente:

Si para las otras pruebas se requiere personal capacitado, calidad preanalítica y muchas condiciones que cuidar, para este estudio mucho más: operadores capacitados, un sistema eficiente de toma/etiquetado de muestras, imagínense a un labo procesando 100 o 500 pruebas a la vez!

Un Architect de ABBOTT cuesta muchísimo, lo puedes tener en tu laboratorio si lo compras o si lo adquieres en comodato y compras reactivos. El reactivo de COVID-19 IgG NO puede utilizarse en otros equipos de quimioluminiscencia porque la tecnología está protegida y es de Abbott.

¿Hay Architects de Abbott instalados en México?
Sí. Sé de muchos lugares.

¿Dónde?
En laboratorios de hospitales principalmente y en algunos privados grandes o que procesan muestras para labos pequeños. Si un labo tiene suficiente demanda de pruebas por QuimioL puede tener uno.

Entonces si un laboratorio tiene instalado un Architect, o lo puede comprar o rentar en comodato, bien puede poner a punto la prueba para IgG de COVID-19 que aprobó la COFEPRIS.

Esta prueba es de tipo CUANTITATIVO. La quimioluminiscencia permite cuantificar la cantidad de IgG presente en los especímenes y determinar un índice o INDEX que es la relación entre el resultado de una muestra y el resultado de la calibración. El valor de corte es INDEX S/C: 1.4

Como verán, se requiere de más cuidados, tecnología, inversión, personal capacitado y toda una serie de requisitos para operar un ARCHITECT y obtener un resultado confiable de la prueba SARS-Cov-2 IgG.

Ojo: es sólo IgG, anticuerpos de protección o de memoria. Nada de IgM.

Sobre el desempeño de la prueba, sólo les voy a explicar esta tablita: Cuando la prueba se realiza después de 14 días de la aparición de síntomas, no reporta falsos positivos. O sea, no reporta a personas sin infectar como infectadas con anticuerpos IgG de protección o de memoria

Okei, también ésta: Hicieron la prueba a muestras que se tomaron meses antes de que apareciera SARS-Cov-2 y en 997 muestras tuvieron 4 falsos positivos, mucho menos que los reportados por las pruebas rápidas.

Al analizar muestras de enfermos de OTRA COSA: CERO falsos positivos.

Por ejemplo:

https://twitter.com/lab_elmont/status/1263220338189651969

De las 3 pruebas que hemos visto, para falsos positivos (FP)(gente que pudiera decirse que ya cursó la infección, pero en realidad no lo ha hecho):
Prueba rápida: 2 FP en 77 muestras (2.6%)
Prueba rápida con fluorescencia: no encontré el dato
Prueba Abbot: 4 FP en 1070 (0.37%)

Miren esta gráfica que presenta Diagreat, el fabricante de la prueba rápida que se lee por fluorescencia.

Aún falta conocer mucho de la inmunología para SARS-Cov-2, pero contar con pruebas de anticuerpos confiables y bien hechas es importante, más no se deben realizar ni recomendar indiscriminadamente.

#COVIDー19

No tengo información de los precios de ninguna de las 3 pruebas aprobadas, dependen mucho del volumen, del mercado, del laboratorio que las procese, etc.

Las pruebas serológicas deben ser vigiladas por los siguientes motivos:

Sólo hay 3 pruebas aprobadas hasta hoy, pero en el mercado pueden haber muchísimas más no aprobadas, incluso piratas, caducas o pruebas rápidas de coronavirus veterinario pero no de COVID-19 humano.

Si vas a hacerte una prueba rápida a un laboratorio, lo más seguro es que ahí mismo la hagan (aunque hay unos muy pequeñitos que mandan la muestra a otro labo más grande para su proceso), pero si te entregan en cuestión de 1 hora puedes pedir que te enseñen el pouch del cassette.

Si te lo muestran, debes ver que esté nuevo, que no haya sido abierto previamente, que no esté caduco, que indique el nombre de la marca y número de lote. Nunca se abren antes pq se humedecen y ya no sirven. Que no se vea reetiquetado.

Si es la prueba rápida de fluorescencia, ahí deberían tener el equipito para leerla y si lo tienen, igual el resultado no debería tardar más de 1 o 2 horas en ser entregado.

Si vas a pedir la prueba de IgG de Abbott:
1. El laboratorio debe tener el equipo.
2. El labo puede tomar tu muestra y mandarlo a un labo de referencia q tenga el equipo. Entre los 2 debe haber un contrato de prestación de servicios, la responsabilidad del resultado es de los 2

Recuerda: TODOS LOS PACIENTES TENEMOS DERECHOS.

Uno de esos derechos es el de la INFORMACIÓN.

Además existe una NOM para el CONSENTIMIENTO INFORMADO y parte del protocolo de consentimiento implica que TE EXPLIQUEN todo el proceso, por lo que puedes pedir la INFO que requieras.

Si HAS TENIDO SÍNTOMAS que te hicieran SOSPECHAR que estuviste infectado de COVID-19 y quieres saber si ya tienes anticuerpos IgG, mi recomendación es que te hagas la prueba por quimioluminiscencia (abbott) DESPUÉS DE 14 DÍAS DE HABER INICIADO LOS SÍNTOMAS, nunca antes.

Todas las pruebas y todos los profesionales de salud lo decimos: UN RESULTADO AISLADO NO ES UN DIAGNÓSTICO. Este tipo de pruebas deben ser conducidas por un médico, debe conocer el cuadro clínico, antecedentes y obtener información diversa para establecer el diagnóstico.

Y creo que hasta aquí llega el hilo para #CuarenCuerna de la @ACMor_Morelos y para @glucosa_atomica que tenía dudas de las pruebas rápidas.

#QuédateEnCasa, sí, todavía. #TúMeCuidasYoTeCuido

Hilito patrocinado por @DETamiz_: Detectemos a tiempo, Detectemos a todos. #Cuernavaca